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初次打仗糖尿病小鼠模子,对这方面有些问题不

作者:旺彩官网时间:2021-10-23 18:59:59 次浏览

信息摘要:

《STZ造模质料》 STZ 诱发糖尿病动物模子的道理 STZ对必然种属动物的胰岛β细胞有选择性粉碎浸染,能诱发很多动物发生糖尿病,一般回收大鼠和小鼠制造动物模子。海外有学者报道选

《STZ造模质料》
STZ 诱发糖尿病动物模子的道理
STZ对必然种属动物的胰岛β细胞有选择性粉碎浸染,能诱发很多动物发生糖尿病,一般回收大鼠和小鼠制造动物模子。海外有学者报道选用雄性大鼠制造模子的成模率明明高于雌性大鼠。1型糖尿病与2型糖尿病动物模子的制备与STZ打针的剂量有干系:大剂量打针时,由于直接引起胰岛β细胞的遍及粉碎,可造成1型糖尿病模子;而打针较少量STZ时,由于只是粉碎一部门胰岛β细胞的成果,造成外周组织对胰岛素不敏感,同时给以高热量饲料喂养,两者团结便诱导出病理、生理改变都靠近于人类2型糖尿病的动物模子。

造膜前的喂养
Ⅰ型糖尿病模子成模较量快,凡是大鼠在普通饲料适应性喂养2周后即可开始造模
Ⅱ型糖尿病模子:高脂饮食诱导加小剂量STZ。造模前喂以高脂(高糖)饲料,诱发出胰岛素抵挡。

高脂(高糖)饲料
高脂(高糖)饲料身分:个中含10%蔗糖,10%猪油,5%胆固醇
由基本鼠饲料加蔗糖、炼猪油和蛋黄按比搭配建造高脂高糖饲料:其比例为猪油18 % ,蔗糖20 % ,蛋黄3 % ,基本饲料59 %。

预尝试的重要性
很重要。尝试时STZ的给药量应参照预尝试的功效,只管不要盲目凭据文献上或他人的给药量来直接利用,鼠均重和空腹(低糖状态)抗药力、禁食时长、打针选时、以及之前饲养进程、测糖选时等都不沟通,通过预尝试来确定切合本身尝试鼠的给药计量,才是最科学的。

常用给药剂量
Ⅰ型糖尿病模子:大鼠剂量为70~65mg/Kg
Ⅱ型糖尿病模子:高糖高脂喂养1~2 个月的大鼠,STZ 剂量在25~40mg/Kg
    或参考文献(鼠均重差异,本剂量以200克均重为例)。

设置STZ液
柠檬酸缓冲液的配制: 柠 檬 酸(FW:210.14) 2.1g插手双蒸水100mL中配成A液 柠檬酸钠(FW:294.10)2.94g插手双蒸水100mL中配成B液
链脲佐菌素配制液:用时将A、B液按必然比例殽杂(1:1.32也有按1:1的),PH计测定ph值,调理ph=4.2-4.5,等于所需设置STZ的柠檬酸缓冲液。
打针时用柠檬酸缓冲液以1%的浓度溶解STZ,按空腹体重打针相应的STZ,  在30分钟内打针完毕。★ STZ容易失活, STZ快速称取后仍要求干燥避光,推荐用干燥铝箔(或锡箔)纸。

可否利用其他溶液设置缓冲液
可以。但我们推荐利用柠檬酸。譬喻用醋酸等溶液,也可以做出,但其PH值欠好节制,而STZ只有在PH4.2-4.5的时候才具有最佳药力活性。

禁食和血糖的接洽
禁食12小时以上(一般留宿禁食,不禁水)。禁食的时间越长,STZ对胰岛β细胞的粉碎力越明明,即药效越高。所以相对禁食时间耽误,可以低落STZ的用量。
腹腔打针和尾部打针的区别
尾部打针即静脉打针,药物操作率较高,同比腹腔打针,可以节减药量,缺点是操纵起来不如腹腔打针利便。

打针前有那些操纵步调?
留宿禁食后称重,按大鼠总重量比称取STZ,放一干燥灭菌瓶内,外用锡纸包好,将柠檬酸缓冲液及装STZ的瓶子置冰浴,一起带到动物房,假如打针操纵技能不纯熟,应两组瓜代打针,发起分组溶解STZ,好比10只或15只鼠/组。

打针时,推进速度和血糖的干系
推注的速度快,更容易形成高血糖,推注的速度慢,相对的危险性较低,但也不容易成模,通例操纵中多要求快速打针。虽然,STZ的剂量是抉择血糖坎坷的主要因素。

死鼠问题的办理
鼠的个别不同和空腹(低血糖)抵挡力的差别而致灭亡率的差异,开始灭亡率高大概主要是血糖溘然升高,鼠不适应,或产生了DKA(即酮症酸中毒)。
首先,必然要担保足够的饮水量(饮水量不敷容易导致死鼠);
其次,高血糖和低血糖城市造成死鼠,制止死鼠可以通过打针胰岛素或临时补糖,两种途径: 1、常见为血糖过高。补胰岛素法,补一些中效胰岛素。譬喻给诺和灵n或NPH(中性鱼精卵白锌胰岛素),每次2--3个单元,过了3-5天,大鼠一般灭亡率就低了;2、补糖法,禁食后的鼠,打针的时候已经处于低血糖状态,造模4小时后腹腔打针百分之20的葡萄糖,可制止因打针时血糖过低死鼠;
再次,防备动物自相残杀。食物缺乏和供水不敷的环境下,会相互撕杀、啃食同类,所以食物和饮水要供给富裕,最好是两路供给;
最后,防备传染。糖尿病大鼠尿量多,垫料湿润,需要勤换垫料,所以糖尿病大鼠较其他大鼠容易呈现传染,出格是泌尿道传染和腹腔传染。腹腔打针、皮下打针及采血测血糖等侵入性操纵前后,要留意消毒事情。如每次采血测血糖后可用四环素(或金霉素眼药膏)局部涂抹处理惩罚伤口防范传染。
模子不达标者,三天后补注STZ(以10mg-20mg/kg体重剂量腹腔打针),也很容易成模,或让血糖规复正常后再通例剂量打针;但要到达抱负的结果,往往是规复到正常状态下从头造模。

STZ的生存要领
2-8℃,干燥避光生存。(注:本品易潮解,如需重复取量进程中,应制止打仗其受水受潮,受潮后30分钟后失效,这和打针时要求其快速打针是一个原理,即其水溶液不不变)。

多次称取STZ时的操纵要领和留意事项
如确实需要多次称取,要严格凭据制止受潮的原则操纵和存放。
操纵要领:操尽兴况、盛装容器、分装东西都必需担保干燥。无需冰浴,分装后用封口膜密封瓶口,用铝箔纸(或锡箔,即避光)将瓶子包好,放入干燥罐里(干燥剂,即保持干燥状态), 并2-8℃冷藏,可恒久生存。本品保质期为3年半。

链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)对机体组织毒性相对较小,动物存活率高,是今朝海表里利用较多的制备糖尿病动物模子的药物。北京泛爱科贸有限公司(  010-83004443  13581988332 QQ:5640341), 为宽大糖尿病研究人员提供高质量、低价值的-------链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ ,旺彩平台注册 ,1g/瓶(灭菌装)¥900/g; 1g/瓶(普通装) ¥750/g; 5g/瓶¥700/g), min≥98.89, SigmaS0130)产物,使您的研究没有后顾之忧。
以上质料仅供参考,不包袱当何数据责任,也真心但愿能给您带来辅佐,为糖尿病科学做些孝敬。
1、试剂配制:
1.1 0.1mol/L pH4.4柠檬酸缓冲液的配制:
A液(0.1mol/L柠檬酸)—称取阐明纯柠檬酸21.014g,用蒸馏水溶解并定容至1L;
B液(0.1mol/L柠檬酸钠)—称取柠檬酸钠29.412g用蒸馏水溶解并定容至1L;
取A液114ml与B液86ml混匀,即为0.1mol/L pH4.4的柠檬酸缓冲液;高压灭菌或δ22μm微孔滤膜过滤灭菌,冰箱中冷藏备用。
1.2 STZ的配制:
STZ用4℃的0. 1M无菌柠檬酸一柠檬酸钠缓冲液(PH=4. 4 )配制,现用现配,避光冷藏,10min 内用完。 留意STZ有毒,需要带口罩和手套。打针剂量:100 mg/kg。打针要领:按每10g体重打针0.3ml,此时溶液的浓度是3.334mg/ml。或平均法打针(忽落个别间的体重差别),0.1ml/只,按照小鼠总量配制相应浓度。

2)就本身在糖尿病大鼠尝试方面的小我私家体会,如下:
不管是四氧嘧啶照旧STZ 造模,造模后的饲养是要害,我们一天要给大鼠换水四至五次,饲料喂三至四次(每次喂足够饲料),换水是早上7:00一次,白日随时补足,晚上10:00再给足水和饲料。尚有有些动物的状态不是很好,大概抢不到足够的饲料和饮水,所以在饲养笼里也要留意插手适当的饲料。为了给足饮水,我们在大鼠饲养笼上再加一个水瓶架,就是比普通的饲养笼要多一个饮水口和双倍水量。
别的,光照也是影响糖尿病大鼠灭亡的原因之一,光照不能太强烈,最好不要有太阳光呈现,如有窗户的房间要把窗户用纸糊起来。
我本人的履历是饲料要保持干燥,湿润后长霉菌DM鼠易腹泻;正常鼠可饮自来水,而DM鼠要给烧开过的水,这样不容易传染;另外垫料必需一天换一次,室内要勤消毒。刚开始我都没留意这些方面,功效一个月死了13只,厥后严格留意,近一个月一只未死。

必然要给糖尿病大鼠多饮水,不然很容易灭亡。要看到没了,就应放上。这个剂量应该可以,最好稍微淘汰1mg阁下。
灭亡原因大概有以下几点:
①大鼠太小,也就是大鼠体重不足,容易引起灭亡。②不知道你用的是什么大鼠,SD?Wistar?假如是后者,灭亡就更多了(只是小我私家履历,还没有获得详细尝试的证实,仅作参考)。③尚有就是在造模后必然要加足水和饲料,并且要留意大鼠的饲养情况,要保持只管清洁,光照不能太强(制止有太阳光)!
我认为在造模后24小时内灭亡的主要原因是胰岛细胞粉碎后胰岛素大量释放导致的低血糖而亡,你不妨拿少量大鼠作个预尝试,测测血糖看看,办理的步伐可在STZ打针后给以0.5%GS饮水。富裕的饮水和保持敷料干燥是成模后淘汰灭亡的要领。
STZ制造的大鼠糖尿病模子灭亡大概原因
①大鼠前一晚是否禁食。②STZ的剂量是否过大,腹腔一般50~60mg/KG.BW,尾静脉打针该当小许多。③配制STZ柠檬酸缓冲液的PH值,配制STZ操纵时是否在冰上操纵。
一般来说回收STZ腹腔打针的环境不会导致大鼠的灭亡。并且较量安详靠得住。





成模尺度:
(1)首先要害是糖尿病模子成模与否的判断,不少报道称造模后血糖有颠簸,发起一连调查。发起检测点:10d、2w、3-4w、5w,以明晰血糖变革,确定模子成立时间。——揣度相关疾病成模时间
STZ造模后,明明血糖程度颠簸泛起3个时相,一过性高血糖(1-2h)、短暂低血糖(6-10h)、一连高血糖(>72h)。必需适当补给胰岛素和葡萄糖。

(2)我也造了一批模子,雄性SD大鼠,体重节制子180-200g,STZ用量60mg/kg,设置要领根楼上的一样,并且我的PH值也没有像此外同学那样用酸碱仪测,只是用PH试纸罢了。可是我以为一周或十天成模的要领不行信,加预尝试我样了80只SD大鼠,腹腔打针后十天成模率90%,2周阁下成模了的大鼠约莫有一半规复,3-4周阁下血糖又开始升高,或许5周阁下,血糖开始不变且较量不变。血糖升高今后天天改换木糠,因为模子组尿量多,我常常是一天换两次,我的模子已经样了8周了,并且天天灌喂,今朝环境还好,临时还没有灭亡,并且我一直没有利用胰岛素。

模子不变性及一连时间
1、WISTAR大鼠(牝牡各半),200-300克体重,STZ用量,60mg/Kg。溶液:柠檬酸缓冲液(0.1mol/l,PH4.5)。腹腔打针。
2、缓冲液新鲜配制,溶解STZ后当即打针,别延长太久了,腹腔打针留意勿入脏器。
3、12小时后,呈现多饮症状,部门的血糖开始升高,7天后血糖大于16.65约80%。十天后90%
4、打针STZ后第二天开始,天天换垫料,留意富裕的水及饲料。
5、雄鼠血糖一连偏高,今朝已经4个月了,很不变。雌鼠血糖不不变,在一个月阁下时间,血糖明明规复,大部门血糖下降到10阁下,一连约一月,又开始上升,到达成模尺度,从此较量不变,
失败原因阐明
10天还没有成模子,大概要思量一下:
1.腹腔打针的技能,是否打针到肠子里了
2.STZ的配制是否符合,用PH4.6阁下的0.1M的柠檬酸缓冲液配制,现配现用,假如操纵慢,最好放在冰浴里。
3.打针STZ之前是否禁食了,应该禁食12h阁下。
发起,再调查3天,照旧不成模子的话,从头打针一次。
 

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